Astratto
Il 9,10-antrachinone (AQ) è un contaminante con un potenziale rischio cancerogeno ed è presente nel tè in tutto il mondo. Il limite massimo di residui (MRL) di AQ nel set da tè stabilito dall'Unione Europea (UE) è 0,02 mg/kg. Le possibili fonti di AQ nella lavorazione del tè e le fasi principali della sua comparsa sono state studiate sulla base di un metodo analitico AQ modificato e di un'analisi gascromatografica-spettrometria di massa tandem (GC-MS/MS). Rispetto all’elettricità come fonte di calore nella lavorazione del tè verde, l’AQ è aumentato da 4,3 a 23,9 volte nella lavorazione del tè con carbone come fonte di calore, superando di gran lunga 0,02 mg/kg, mentre il livello di AQ nell’ambiente è triplicato. La stessa tendenza è stata osservata nella lavorazione del tè oolong sotto il calore del carbone. Le fasi con contatto diretto tra foglie di tè e fumi, come la fissazione e l'essiccazione, sono considerate le fasi principali della produzione dell'AQ nella lavorazione del tè. I livelli di AQ aumentavano con l’aumento del tempo di contatto, suggerendo che alti livelli di inquinante AQ nel tè potrebbero derivare dai fumi causati dal carbone e dalla combustione. Sono stati analizzati quaranta campioni provenienti da diverse officine con elettricità o carbone come fonti di calore, con un range compreso tra 50,0% -85,0% e 5,0% -35,0% per il rilevamento e il superamento dei tassi di AQ. Inoltre, nel prodotto a base di tè con carbone come fonte di calore è stato osservato il contenuto massimo di AQ pari a 0,064 mg/kg, indicando che è probabile che gli alti livelli di contaminazione di AQ nei prodotti a base di tè siano dovuti al carbone.
Parole chiave: 9,10-antrachinone, lavorazione del tè, carbone, fonte di contaminazione
INTRODUZIONE
Il tè prodotto con le foglie dell'arbusto sempreverde Camellia sinensis (L.) O. Kuntze, è una delle bevande più apprezzate a livello mondiale grazie al suo gusto rinfrescante e ai benefici per la salute. Nel 2020, a livello globale, la produzione di tè è aumentata a 5.972 milioni di tonnellate, raddoppiando negli ultimi 20 anni[1]. In base ai diversi metodi di lavorazione, esistono sei tipi principali di tè, tra cui tè verde, tè nero, tè scuro, tè oolong, tè bianco e tè giallo[2,3]. Per garantire la qualità e la sicurezza dei prodotti, è molto importante monitorare i livelli di inquinanti e definirne l'origine.

Identificare le fonti di contaminanti, come residui di pesticidi, metalli pesanti e altri inquinanti come gli idrocarburi policiclici aromatici (IPA), è il passo principale per controllare l’inquinamento. L'irrorazione diretta di sostanze chimiche sintetiche nelle piantagioni di tè, così come la deriva dell'aria causata dalle operazioni vicino alle piantagioni di tè, sono la principale fonte di residui di pesticidi nel tè[4]. I metalli pesanti possono accumularsi nel tè e causare tossicità, che derivano principalmente dal suolo, dai fertilizzanti e dall’atmosfera[5-7]. Per quanto riguarda altri tipi di inquinamento comparsi inaspettatamente nel tè, è stato piuttosto difficile identificarli a causa delle complesse procedure della catena di produzione del tè, tra cui piantagione, lavorazione, confezionamento, stoccaggio e trasporto. Gli IPA presenti nel tè provengono dalla deposizione degli scarichi dei veicoli e dalla combustione dei combustibili utilizzati durante la lavorazione delle foglie di tè, come legna da ardere e carbone[8−10].

Durante la combustione del carbone e della legna si formano sostanze inquinanti come gli ossidi di carbonio[11]. Di conseguenza, è possibile che residui di questi inquinanti sopra menzionati si formino ad alte temperature nei prodotti trasformati, come cereali, brodo affumicato e pesce gatto, mettendo a rischio la salute umana[12,13]. Gli IPA causati dalla combustione derivano dalla volatilizzazione degli IPA contenuti nei combustibili stessi, dalla decomposizione ad alta temperatura dei composti aromatici e dalla reazione composta tra radicali liberi[14]. La temperatura, il tempo e il contenuto di ossigeno della combustione sono fattori importanti che influenzano la conversione degli IPA. Con l'aumento della temperatura il contenuto di IPA è prima aumentato e poi diminuito, raggiungendo il valore massimo a 800 °C; Il contenuto di IPA è diminuito drasticamente fino a risalire all'aumentare del tempo di combustione quando era al di sotto di un limite chiamato "tempo limite", con l'aumento del contenuto di ossigeno nell'aria di combustione, le emissioni di IPA si sono ridotte in modo significativo, ma l'ossidazione incompleta avrebbe prodotto OPAH e altri derivati[15 −17].

Il 9,10-antrachinone (AQ, CAS: 84-65-1, Fig. 1), un derivato degli IPA contenente ossigeno[18], è costituito da tre cicli condensati. È stato elencato come possibile cancerogeno (Gruppo 2B) dall'Agenzia internazionale per la ricerca sul cancro nel 2014[19]. L'AQ può avvelenare il complesso di scissione della topoisomerasi II e inibire l'idrolisi dell'adenosina trifosfato (ATP) da parte della DNA topoisomerasi II, causando rotture del doppio filamento del DNA, il che significa che l'esposizione a lungo termine in un ambiente contenente AQ e il contatto diretto con un alto livello di AQ può causare danni al DNA, mutazioni e aumentare il rischio di cancro[20]. Considerati gli effetti negativi sulla salute umana, l'Unione Europea ha fissato nel tè il limite massimo di residui AQ (MRL) di 0,02 mg/kg. Secondo i nostri studi precedenti, i depositi di AQ sono stati suggeriti come la fonte principale durante la piantagione di tè[21]. Inoltre, sulla base delle conseguenze sperimentali nella lavorazione del tè verde e nero indonesiano, è ovvio che il livello di AQ è cambiato in modo significativo e il fumo proveniente dalle apparecchiature di lavorazione è stato suggerito come uno dei motivi principali[22]. Tuttavia, l'origine precisa dell'AQ nella lavorazione del tè è rimasta sfuggente, sebbene siano state suggerite alcune ipotesi sul percorso chimico dell'AQ[23,24], indicando che è estremamente importante determinare i fattori cruciali che influenzano il livello di AQ nella lavorazione del tè.

Figura 1. La formula chimica di AQ.

Considerando la ricerca sulla formazione di AQ durante la combustione del carbone e la potenziale minaccia dei combustibili nella lavorazione del tè, è stato condotto un esperimento comparativo per spiegare l'effetto della lavorazione delle fonti di calore sull'AQ nel tè e nell'aria, analisi quantitativa sui cambiamenti del contenuto di AQ in diverse fasi di lavorazione, il che è utile per confermare l'origine accurata, il modello di occorrenza e il grado di inquinamento dell'AQ nella lavorazione del tè.

RISULTATI
Convalida del metodo
Rispetto al nostro studio precedente[21], una procedura di estrazione liquido-liquido è stata combinata prima dell'iniezione in GC-MS/MS al fine di migliorare la sensibilità e mantenere le dichiarazioni strumentali. Nella Figura 2b, il metodo migliorato ha mostrato un miglioramento significativo nella purificazione del campione, il solvente è diventato di colore più chiaro. Nella Figura 2a, uno spettro di scansione completo (50-350 m/z) illustrava che dopo la purificazione, la linea di base dello spettro MS si riduceva ovviamente ed erano disponibili meno picchi cromatografici, indicando che un gran numero di composti interferenti erano stati rimossi dopo la estrazione liquido-liquido.

Figura 2. (a) Spettro di scansione completo del campione prima e dopo la purificazione. (b) L'effetto di purificazione del metodo migliorato.
La validazione del metodo, inclusi linearità, recupero, limite di quantificazione (LOQ) ed effetto matrice (ME), sono mostrati nella Tabella 1. È soddisfacente ottenere la linearità con il coefficiente di determinazione (r2) superiore a 0,998, che variava da 0,005 a 0,2 mg/kg nella matrice del tè e nel solvente acetonitrile e nel campione di aria con un intervallo compreso tra 0,5 e 8 μg/m3.

Il recupero di AQ è stato valutato a tre concentrazioni aggiunte tra le concentrazioni misurate e quelle effettive nel tè secco (0,005, 0,02, 0,05 mg/kg), germogli di tè freschi (0,005, 0,01, 0,02 mg/kg) e campione di aria (0,5, 1,5, 3 µg/m3). Il recupero di AQ nel tè variava dal 77,78% al 113,02% nel tè secco e dal 96,52% al 125,69% nei germogli di tè, con RSD% inferiore al 15%. Il recupero di AQ nei campioni di aria variava dal 78,47% al 117,06% con RSD% inferiore al 20%. La concentrazione più bassa è stata identificata come LOQ, che era 0,005 mg/kg, 0,005 mg/kg e 0,5 μg/m³ rispettivamente nei germogli di tè, nel tè secco e nei campioni di aria. Come elencato nella Tabella 1, la matrice del tè secco e dei germogli di tè ha leggermente aumentato la risposta AQ, portando all'EM del 109,0% e del 110,9%. Per quanto riguarda la matrice dei campioni di aria, la ME è stata del 196,1%.

I livelli di AQ durante la lavorazione del tè verde
Con l'obiettivo di scoprire gli effetti delle diverse fonti di calore sul tè e sull'ambiente di lavorazione, un lotto di foglie fresche è stato diviso in due gruppi specifici e lavorato separatamente in due laboratori di lavorazione della stessa azienda. Un gruppo è stato fornito di elettricità e l’altro di carbone.

Come mostrato in Fig. 3, il livello AQ con l'elettricità come fonte di calore variava da 0,008 a 0,013 mg/kg. Durante il processo di fissazione, l'essiccazione delle foglie di tè causata dalla lavorazione in una pentola ad alta temperatura ha comportato un aumento del 9,5% dell'AQ. Quindi, il livello di AQ è rimasto durante il processo di laminazione nonostante la perdita di succo, suggerendo che i processi fisici potrebbero non influenzare il livello di AQ nella lavorazione del tè. Dopo le prime fasi di essiccazione, il livello di AQ è aumentato leggermente da 0,010 a 0,012 mg/kg, quindi ha continuato a salire fino a 0,013 mg/kg fino alla fine della riessiccazione. I PF, che hanno mostrato in modo significativo la variazione in ciascuna fase, erano 1,10, 1,03, 1,24, 1,08 rispettivamente nella fissazione, laminazione, prima essiccazione e riessiccazione. I risultati dei PF hanno suggerito che la lavorazione con energia elettrica ha avuto un leggero effetto sui livelli di AQ nel tè.

Figura 3. Il livello AQ durante la lavorazione del tè verde con elettricità e carbone come fonti di calore.
Nel caso del carbone come fonte di calore, il contenuto di AQ è aumentato notevolmente durante la lavorazione del tè, passando da 0,008 a 0,038 mg/kg. Nella procedura di fissazione è stato aumentato il 338,9% di AQ, raggiungendo 0,037 mg/kg, che ha superato di gran lunga l'MRL di 0,02 mg/kg stabilito dall'Unione Europea. Durante la fase di laminazione, il livello di AQ è aumentato ancora del 5,8% nonostante fosse lontano dalla macchina di fissazione. Durante la prima essiccazione e la riessiccazione, il contenuto di AQ è aumentato di poco o è diminuito leggermente. I PF che utilizzavano il carbone come fonte di calore nella fissazione, nella prima essiccazione e nella riessiccazione erano rispettivamente 4,39, 1,05, 0,93 e 1,05.

Per determinare ulteriormente la relazione tra la combustione del carbone e l'inquinamento AQ, i particolati sospesi (PM) nell'aria nelle officine sotto entrambe le fonti di calore sono stati raccolti per la valutazione dell'aria, come mostrato in Fig. 4. Il livello AQ dei PM con carbone come la fonte di calore era di 2,98 μg/m3, ovvero oltre tre volte superiore a quella dell'elettricità di 0,91 μg/m3.

Figura 4. I livelli di AQ nell’ambiente con elettricità e carbone come fonte di calore. * Indica differenze significative nei livelli di AQ nei campioni (p < 0,05).

I livelli di AQ durante la lavorazione del tè oolong Il tè Oolong, prodotto principalmente nel Fujian e a Taiwan, è un tipo di tè parzialmente fermentato. Per determinare ulteriormente le fasi principali dell’aumento del livello di QA e gli effetti dei diversi combustibili, lo stesso lotto di foglie fresche è stato trasformato in tè oolong con carbone e ibrido gas naturale-elettrico come fonti di calore, simultaneamente. I livelli di AQ nella lavorazione del tè oolong utilizzando diverse fonti di calore sono mostrati nella Fig. 5. Per la lavorazione del tè oolong con un ibrido gas naturale-elettrico, la tendenza del livello di AQ è rimasta stagnante al di sotto di 0,005 mg/kg, che era simile a quella del tè verde con l'elettricità.

Figura 5. Il livello di AQ durante la lavorazione del tè oolong con una miscela di gas naturale ed elettricità e carbone come fonte di calore.

Con il carbone come fonte di calore, i livelli di QA nelle prime due fasi, appassimento e inverdimento, erano essenzialmente gli stessi della miscela gas naturale-elettricità. Tuttavia, le procedure successive fino alla fissazione hanno mostrato che il divario si è ampliato gradualmente, a quel punto il livello di AQ è aumentato da 0,004 a 0,023 mg/kg. Il livello nella fase di laminazione del prodotto è sceso a 0,018 mg/kg, il che potrebbe essere dovuto alla perdita di succo di tè che porta via alcuni contaminanti dell'AQ. Dopo la fase di laminazione, il livello nella fase di essiccazione è aumentato a 0,027 mg/kg. Nell'appassimento, nell'inverdimento, nella fissazione, nell'arrotolamento e nell'essiccazione, i PF erano rispettivamente 2,81, 1,32, 5,66, 0,78 e 1,50.

La presenza di AQ nei prodotti a base di tè con diverse fonti di calore

Per determinare gli effetti sul contenuto di AQ del tè con diverse fonti di calore, sono stati analizzati 40 campioni di tè provenienti da laboratori del tè che utilizzavano elettricità o carbone come fonti di calore, come mostrato nella Tabella 2. Rispetto all’utilizzo dell’elettricità come fonte di calore, il carbone aveva il maggior valore tassi di rilevamento (85,0%) con il livello massimo di AQ di 0,064 mg/kg, indicando che era facile causare contaminanti AQ dai fumi prodotti dalla combustione del carbone, e un tasso del 35,0% è stato osservato nei campioni di carbone. In modo più evidente, l'elettricità ha registrato i tassi di rilevamento e di eccedenza più bassi, rispettivamente del 56,4% e del 7,7%, con un contenuto massimo di 0,020 mg/kg.

DISCUSSIONE

Sulla base dei PF durante la lavorazione con i due tipi di fonti di calore, era chiaro che la fissazione era il passo principale che portava all’aumento dei livelli di AQ nella produzione di tè con carbone e che la lavorazione con energia elettrica aveva un leggero effetto sul contenuto di AQ nel tè. Durante la lavorazione del tè verde, la combustione del carbone produceva molti fumi nel processo di fissazione rispetto al processo di riscaldamento elettrico, indicando che forse i fumi erano la principale fonte di inquinanti AQ derivanti dal contatto immediato con i germogli di tè durante la lavorazione del tè, simile al processo di esposizione in i campioni di barbecue affumicato[25]. Il leggero aumento del contenuto di AQ durante la fase di laminazione ha suggerito che i fumi causati dalla combustione del carbone non solo hanno influenzato il livello di AQ durante la fase di fissazione, ma anche nell’ambiente di lavorazione a causa della deposizione atmosferica. Come fonte di calore sono stati utilizzati anche i carboni nella prima essiccazione e nella riessiccazione, ma in queste due fasi il contenuto di AQ è leggermente aumentato o diminuito leggermente. Ciò può essere spiegato dal fatto che l'essiccatore chiuso a vento caldo teneva il tè lontano dai fumi causati dalla combustione del carbone[26]. Per determinare la fonte dell'inquinamento sono stati analizzati i livelli di QA nell'atmosfera, risultando un divario significativo tra i due laboratori. La ragione principale di ciò è che il carbone utilizzato nelle fasi di fissazione, prima essiccazione e riessiccazione genererebbe AQ durante la combustione incompleta. Questi AQ sono stati poi adsorbiti nelle piccole particelle di solidi dopo la combustione del carbone e dispersi nell'aria, aumentando i livelli di inquinamento dell'AQ nell'ambiente dell'officina[15]. Nel tempo, a causa dell’ampia superficie specifica e della capacità di assorbimento del tè, questi particolati si depositano sulla superficie delle foglie di tè, determinando un aumento dell’AQ nella produzione. Pertanto, si pensava che la combustione del carbone fosse la via principale che portava a un’eccessiva contaminazione da AQ nella lavorazione del tè, essendo i fumi la fonte di inquinamento.

Per quanto riguarda la lavorazione del tè oolong, la QA è aumentata durante la lavorazione con entrambe le fonti di calore, ma la differenza tra le due fonti di calore era significativa. I risultati hanno anche suggerito che il carbone come fonte di calore ha svolto un ruolo importante nell’aumento del livello di QA e la fissazione è stata considerata il passo principale per aumentare la contaminazione di QA nella lavorazione del tè oolong basata sui PF. Durante la lavorazione del tè oolong con l'ibrido gas naturale-elettrico come fonte di calore, la tendenza del livello di AQ ristagnava al di sotto di 0,005 mg/kg, che era simile a quella del tè verde con l'elettricità, suggerendo che l'energia pulita, come l'elettricità e il naturale gas, può ridurre il rischio di produrre contaminanti AQ durante la lavorazione.

Per quanto riguarda i test di campionamento, i risultati hanno mostrato che la situazione di contaminazione dell’AQ era peggiore quando si utilizzava il carbone come fonte di calore piuttosto che l’elettricità, il che potrebbe essere dovuto al fatto che i fumi della combustione del carbone entrano in contatto con le foglie di tè e permangono sul posto di lavoro. Tuttavia, sebbene fosse ovvio che l’elettricità fosse la fonte di calore più pulita durante la lavorazione del tè, c’erano ancora contaminanti AQ nei prodotti a base di tè che utilizzavano l’elettricità come fonte di calore. La situazione sembra leggermente simile al lavoro pubblicato in precedenza in cui la reazione dei 2-alchenali con idrochinoni e benzochinoni veniva suggerita come potenziale percorso chimico[23], le ragioni di ciò saranno studiate nella ricerca futura.

CONCLUSIONI

In questo lavoro, le possibili fonti di inquinamento da AQ nel tè verde e oolong sono state confermate da esperimenti comparativi basati su metodi analitici GC-MS/MS migliorati. I nostri risultati hanno direttamente sostenuto che la principale fonte di inquinanti di alti livelli di AQ erano i fumi causati dalla combustione, che non solo influenzavano le fasi di lavorazione ma influenzavano anche gli ambienti di officina. A differenza delle fasi di laminazione e appassimento, dove i cambiamenti nel livello di AQ erano poco appariscenti, le fasi con coinvolgimento diretto di carbone e legna da ardere, come la fissazione, sono il processo principale in cui la contaminazione di AQ aumenta a causa della quantità di contatto tra il tè e il tè. e fumi durante queste fasi. Pertanto, come fonte di calore nella lavorazione del tè, sono stati consigliati combustibili puliti come il gas naturale e l’elettricità. Inoltre, i risultati sperimentali hanno mostrato che in assenza di fumi generati dalla combustione, c'erano ancora altri fattori che contribuivano alla traccia di AQ durante la lavorazione del tè, mentre piccole quantità di AQ sono state osservate anche in officina con combustibili puliti, che dovrebbero essere ulteriormente studiate nella ricerca futura.

MATERIALI E METODI

Reagenti, prodotti chimici e materiali

Lo standard antrachinonico (99,0%) è stato acquistato dalla società Dr. Ehrenstorfer GmbH (Augusta, Germania). Lo standard interno D8-antrachinone (98,6%) è stato acquistato da C/D/N Isotopes (Quebec, Canada). Solfato di sodio anidro (Na2SO4) e solfato di magnesio (MgSO4) (Shanghai, Cina). Florisil è stato fornito da Wenzhou Organic Chemical Company (Wenzhou, Cina). La carta in fibra di vetro micro (90 mm) è stata acquistata dalla società Ahlstrom-munksjö (Helsinki, Finlandia).

Preparazione del campione

I campioni di tè verde sono stati trattati con fissazione, arrotolamento, prima essiccazione e riessiccazione (utilizzando attrezzature chiuse), mentre i campioni di tè oolong sono stati trattati con appassimento, resa verde (oscillando e lasciando in piedi le foglie fresche alternativamente), fissazione, arrotolamento imballato e essiccazione. I campioni di ciascuna fase sono stati raccolti tre volte a 100 g dopo un'accurata miscelazione. Tutti i campioni sono stati conservati a -20 °C per ulteriori analisi.

I campioni di aria sono stati raccolti su carta in fibra di vetro (90 mm) utilizzando campionatori a volume medio (PTS-100, Qingdao Laoshan Electronic Instrument Company, Qingdao, Cina)[27], funzionanti a 100 L/min per 4 ore.

I campioni fortificati sono stati arricchiti con AQ a 0,005 mg/kg, 0,010 mg/kg, 0,020 mg/kg per i germogli di tè freschi, a 0,005 mg/kg, 0,020 mg/kg, 0,050 mg/kg per il tè secco e a 0,012 mg/kg (0,5 µg/m3 per il campione d'aria), 0,036 mg/kg (1,5 µg/m3 per il campione d'aria), 0,072 mg/kg (3,0 µg/m3 per il campione d'aria) per la carta da filtro in vetro, rispettivamente. Dopo aver agitato accuratamente, tutti i campioni sono stati lasciati per 12 ore, seguiti dalle fasi di estrazione e purificazione.

Il contenuto di umidità è stato ottenuto prelevando 20 g del campione dopo aver miscelato ogni passaggio, riscaldandolo a 105 °C per 1 ora, quindi pesandolo e ripetendo tre volte e prendendo il valore medio e dividendolo per il peso prima del riscaldamento.

Estrazione e purificazione del campione

Campione di tè: l'estrazione e la purificazione dell'AQ dai campioni di tè è stata eseguita sulla base del metodo pubblicato da Wang et al. con diversi adattamenti[21]. In breve, 1,5 g di campioni di tè sono stati prima miscelati con 30 μL di D8-AQ (2 mg/kg) e lasciati riposare per 30 minuti, quindi ben miscelati con 1,5 ml di acqua deionizzata e lasciati riposare per 30 minuti. Ai campioni di tè sono stati aggiunti 15 ml di acetone al 20% in n-esano e sonicati per 15 minuti. Quindi i campioni sono stati agitati in vortex con 1,0 g di MgSO4 per 30 secondi e centrifugati per 5 minuti a 11.000 giri/min. Dopo essere stati spostati in palloni a forma di pera da 100 mL, 10 mL della fase organica superiore sono stati evaporati quasi a secchezza sotto vuoto a 37 °C. 5 mL di acetone al 2,5% in n-esano hanno ridisciolto l'estratto in matracci a forma di pera per la purificazione. La colonna di vetro (10 cm × 0,8 cm) era costituita dal basso verso l'alto da lana di vetro e 2 g di florisil, che si trovava tra due strati di 2 cm di Na2SO4. Quindi 5 mL di acetone al 2,5% in n-esano hanno prelavato la colonna. Dopo aver caricato la soluzione ridisciolta, AQ è stato eluito tre volte con 5 mL, 10 mL, 10 mL di acetone al 2,5% in n-esano. Gli eluati riuniti furono trasferiti in palloni a forma di pera ed evaporati quasi a secchezza sotto vuoto a 37°C. Il residuo essiccato è stato quindi ricostituito con 1 mL di acetone al 2,5% in esano seguito da filtrazione attraverso un filtro con dimensione dei pori di 0,22 µm. Quindi la soluzione ricostituita è stata miscelata con acetonitrile in un rapporto in volume di 1:1. Dopo la fase di agitazione, il subnatante è stato utilizzato per l'analisi GC-MS/MS.

Campione d'aria: metà della carta in fibra, gocciolata con 18 μL di d8-AQ (2 mg/kg), è stata immersa in 15 ml di acetone al 20% in n-esano, quindi sonicata per 15 minuti. La fase organica è stata separata mediante centrifugazione a 11.000 giri al minuto per 5 minuti e l'intero strato superiore è stato rimosso in un pallone a forma di pera. Tutte le fasi organiche sono state evaporate quasi a secchezza sotto vuoto a 37°C. 5 mL di acetone al 2,5% in esano hanno ridisciolto gli estratti per la purificazione allo stesso modo dei campioni di tè.

Analisi GC-MS/MS

Il gascromatografo Varian 450 dotato di rilevatore di massa tandem Varian 300 (Varian, Walnut Creek, CA, USA) è stato utilizzato per eseguire l'analisi AQ con il software MS WorkStation versione 6.9.3. Per la separazione cromatografica è stata utilizzata la colonna capillare Varian Factor Four VF-5ms (30 m × 0,25 mm × 0,25 μm). Il gas di trasporto, l'elio (> 99,999%), è stato impostato a una portata costante di 1,0 ml/min con il gas di collisione Argon (> 99,999%). La temperatura del forno è iniziata da 80 °C e mantenuta per 1 minuto; è aumentata a 15 °C/min fino a 240 °C, quindi ha raggiunto 260 °C a 20 °C/min e mantenuta per 5 minuti. La temperatura della sorgente ionica era di 210 °C, così come la temperatura della linea di trasferimento di 280 °C. Il volume di iniezione era 1,0 μL. Le condizioni MRM sono mostrate nella Tabella 3.

Il gascromatografo Agilent 8890 dotato di spettrometro di massa a triplo quadrupolo Agilent 7000D (Agilent, Stevens Creek, CA, USA) è stato utilizzato per analizzare l'effetto di purificazione con il software MassHunter versione 10.1. Per la separazione cromatografica è stata utilizzata la colonna Agilent J&W HP-5ms GC (30 m × 0,25 mm × 0,25 μm). Il gas di trasporto, elio (> 99,999%), è stato impostato a una portata costante di 2,25 ml/min con il gas di collisione azoto (> 99,999%). La temperatura della sorgente ionica EI è stata regolata a 280 °C, la stessa temperatura della linea di trasferimento. La temperatura del forno partiva da 80°C e veniva mantenuta per 5 minuti; aumentata di 15 °C/min fino a 240 °C, quindi raggiunta 280 °C a 25 °C/min e mantenuta per 5 minuti. Le condizioni MRM sono mostrate nella Tabella 3.

Analisi statistica
Il contenuto di AQ nelle foglie fresche è stato corretto in base al contenuto di sostanza secca dividendo per il contenuto di umidità al fine di confrontare e analizzare i livelli di AQ durante la lavorazione.

Le variazioni dell'AQ nei campioni di tè sono state valutate con il software Microsoft Excel e IBM SPSS Statistics 20.

Il fattore di lavorazione è stato utilizzato per descrivere i cambiamenti nell’AQ durante la lavorazione del tè. PF = Rl/Rf , dove Rf è il livello AQ prima della fase di elaborazione e Rl è il livello AQ dopo la fase di elaborazione. PF indica una diminuzione (PF < 1) o un aumento (PF > 1) dell'AQ residuo durante una specifica fase di lavorazione.

ME indica una diminuzione (ME < 1) o un aumento (ME > 1) in risposta agli strumenti analitici, che si basa sul rapporto delle pendenze di calibrazione nella matrice e nel solvente come segue:

ME = (matrice pendenza/solvente pendenza − 1) × 100%

Dove Slopematrix è la pendenza della curva di calibrazione nel solvente corrispondente alla matrice, Slopesolvent è la pendenza della curva di calibrazione nel solvente.

RICONOSCIMENTI
Questo lavoro è stato sostenuto dal grande progetto scientifico e tecnologico nella provincia di Zhejiang (2015C12001) e dalla National Science Foundation of China (42007354).
Conflitto di interessi
Gli autori dichiarano di non avere alcun conflitto di interessi.
Diritti e permessi
Copyright: © 2022 dell'autore/i. Licenziatario esclusivo Maximum Academic Press, Fayetteville, GA. Questo articolo è un articolo ad accesso aperto distribuito sotto la licenza Creative Commons Attribution (CC BY 4.0), visitare https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.
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Yu J, Zhou L, Wang X, Yang M, Sun H, et al. 2022. Contaminazione da 9,10-antrachinone nella lavorazione del tè utilizzando il carbone come fonte di calore. Ricerca sulle piante per bevande 2: 8 doi: 10.48130/BPR-2022-0008